微(wei)生(sheng)物培(pei)養(yang)之(zhi)甲(jia)烷(wan)氧化(hua)菌細(xi)菌培(pei)養(yang)

‌甲(jia)烷(wan)氧化(hua)菌是(shi)壹類(lei)能夠(gou)利用(yong)甲烷(wan)作(zuo)為碳(tan)源(yuan)和(he)能量(liang)的特殊微(wei)生(sheng)物。它(ta)們廣泛(fan)分(fen)布於土壤(rang)、濕(shi)地(di)和(he)海洋(yang)等(deng)環境(jing)中，是(shi)自然界(jie)中控(kong)制甲(jia)烷(wan)排放的(de)關鍵(jian)生(sheng)物過(guo)濾器(qi)。研究該類(lei)微生(sheng)物對(dui)於緩(huan)解(jie)溫(wen)室效(xiao)應、開發生(sheng)物減(jian)排技術(shu)以(yi)及理(li)解(jie)全球碳(tan)循環過(guo)程具有(you)重要科(ke)學和(he)應用(yong)價值。

壹、常用(yong)配置：

• 溫(wen)度：25~30℃

• 轉(zhuan)速(su)：120~180rpm

• 培(pei)養(yang)瓶規(gui)格：100~250ml

二、方(fang)案(an)原(yuan)理(li)：

典(dian)型(xing)場景(jing)：甲(jia)烷(wan)氧化(hua)菌的(de)富(fu)集培(pei)養(yang)研究

配置參(can)數與(yu)原(yuan)理(li)：

• 溫(wen)度：25~30℃

甲(jia)烷氧化(hua)菌是(shi)壹類(lei)對(dui)溫(wen)度條(tiao)件較(jiao)為敏(min)感(gan)的(de)微生(sheng)物，其(qi)生(sheng)長(chang)適(shi)宜(yi)溫(wen)度因菌種(zhong)差異而(er)有(you)所(suo)不同。通常(chang)來(lai)說(shuo)，這類微生(sheng)物最(zui)適(shi)宜(yi)在(zai)25℃至30℃的(de)環境(jing)中生(sheng)長(chang)。當溫(wen)度低(di)於20℃或超過(guo)35℃時，其生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態、代謝活性及(ji)生(sheng)理(li)功(gong)能均(jun)可能受到抑制。多項研究結(jie)果(guo)表明(ming)，在(zai)25℃–30℃的培(pei)養(yang)條件下(xia)，甲烷(wan)氧化(hua)菌能(neng)夠(gou)表(biao)現出(chu)較(jiao)高的(de)甲(jia)烷氧化(hua)效率(lv)與(yu)較(jiao)快(kuai)的(de)生(sheng)長(chang)速(su)率(lv)。因此，在(zai)溫(wen)室培(pei)養土中，將溫(wen)度控(kong)制在(zai)該區間內(nei)，有(you)助於優(you)化(hua)其培(pei)養效(xiao)果(guo)。

• 轉速(su)：120~180rpm

甲(jia)烷(wan)培養(yang)：采用(yong)250m1三角搖瓶，裝100m無機鹽培(pei)養基，菌體(ti)接(jie)種(zhong)量10%(V/V)，使(shi)用(yong)帶有(you)玻璃(li)管(guan)的(de)膠(jiao)塞(sai)封口(kou)。在(zai)上層的空(kong)氣(qi)中置換(huan)入(ru)甲(jia)烷(wan)，甲烷和(he)空(kong)氣(qi)體積比為1:1-1:5，28℃、180rpm 空(kong)氣(qi)浴搖床(chuang)培(pei)養(yang)。每 24h 換(huan)氣(qi)壹次。

提速(su)方(fang)法(fa)：1.可以(yi)加(jia)入甲(jia)醇，提供(gong)充分的(de)碳(tan)源(yuan)，從(cong)而(er)提高細(xi)胞(bao)密度。最(zui)佳(jia)添加(jia)量為0.05%（V/V）。2.可以(yi)加(jia)入石蠟(la)油(you)，作(zuo)為壹種(zhong)甲烷(wan)傳遞體，提高甲(jia)烷(wan)的利用(yong)率。最(zui)佳(jia)添加(jia)量為2.5%（V/V）

文(wen)獻(xian)出(chu)處(chu)：[1]辛(xin)嘉英, 董靜(jing), 梁洪(hong)野, 張帥, 王(wang)艷, & 夏(xia)春(chun)谷. (2010). 甲(jia)烷氧化(hua)菌的(de)高密(mi)度(du)培養(yang).

其他實驗(yan)要求(qiu)也(ye)有(you)提到：“樣本在(zai)30℃、120/min的恒(heng)溫(wen)培養(yang)箱內(nei)恒(heng)溫(wen)振(zhen)蕩浸(jin)泡48h後(hou)取出(chu)，這樣的操(cao)作(zuo)。"

• 培(pei)養(yang)瓶(ping)規格：100~250ml

在(zai)實驗(yan)室(shi)搖瓶培養(yang)中，選(xuan)擇100-250 mL容(rong)器（如(ru)錐(zhui)形瓶(ping)）並(bing)控制(zhi)裝液量（如(ru)50 mL/250 mL），是(shi)為了優(you)化(hua)氧氣(qi)和(he)甲烷(wan)的傳輸(shu)效(xiao)率。該(gai)規格能在(zai)搖動(dong)時形成(cheng)最(zui)佳(jia)氣(qi)液界(jie)面(mian)，提(ti)供(gong)充足氣(qi)體交換(huan)，防(fang)止濺出(chu)，並(bing)兼(jian)顧操(cao)作(zuo)便利性與(yu)成(cheng)本(ben)，是(shi)滿(man)足(zu)這類高耗氧微生(sheng)物生(sheng)長(chang)需(xu)求(qiu)的(de)理(li)想規(gui)模(mo)。